Значение рецепторов эстрогена и прогестерона в клетках рака молочной железы. Методы их определения

Экспрессия рецепторов эстрогена и прогестерона в опухолевых клетках РМЖ коррелирует с гистологической дифференцировкой опухоли и ответом на гормональную терапию, особенно у пациенток в постменопаузальный период [90].

S.M. Veronese и соавторы исследовали 257 больных с РМЖ и установили, что опухоли с рецептором эстрогена (ЭR+) протекают более благоприятно с высокой общей и безрецидивной выживаемостью. Однако прогностическое значение рецептора эстрогена утрачивалось у пациенток, не получающих тамоксифен, а прошедших лечение химиотерапией [91].

По данным литературы положительный эффект гормональной терапии отмечали в 77% случаев РМЖ ЭR+/ПР+ (эстрогена рецептор+/прогестерона рецептор+), в 27% — с раком ЭR+/ПР-, в 46% — с раком ЕR-/ПР+, в 11% — с раком ЕR-/ПР-. Необходимо отметить, что 33% пациенток с РМЖ с положительным гормональным статусом не отвечали на гормональную терапию [92–96]. В какой-то степени неожиданный ответ на гормональную терапию может быть объяснен тем, что большая часть данных базируется на исследовании рецепторов эстрогена и прогестерона биохимическим методом, который не позволяет оценить рецепторы гормонов только в клетках опухоли. Этот метод определяет наличие рецепторов гормонов во всем тканевом кусочке, в том числе в строме и нормальных протоках молочной железы. Применение иммуногистохимического метода исследования позволяет избежать этого, так как исследуется тканевой срез с визуальной окраской структуры ткани и локализации рецепторов эстрогена и прогестерона. Использование моноклональных антител второго поколения, работающих на парафиновых срезах, а также антигенвосстанавливающей техники демаскировки позволило значительно повысить чувствительность метода. Результаты сравнительных исследований биохимического и иммуногистохимического методов исследования показали высокую зависимость между ними и более выраженную специфичность последнего метода [97—104].Тем не менее иммуногистохимический метод исследования более сложный в выполнении и оценке реакции. В обзоре литературы АСКО за 1995 г. сделано заключение, что рецепторы эстрогена и прогестерона должны исследоваться не только в первичной опухоли, но и метастазе, причем результаты исследования метастаза более информативны для оценки прогноза отклика на гормональную терапию [102]. Также отмечено, что для оценки иммуногистохимической реакции не имеет значение интенсивность окраски, важен только факт позитивного окрашивания (фото 92, 93).

Фото 91. Экспрессия Estrogen receptor (клон 1D5, производство DAKO). Иммуногистохимическое окрашивание, система визуализации EnVision, хромоген DAB, х 400

Фото 92. Экспрессия Progesteron receptor (клон 636, производство DAKO). Иммуногистохимическое окрашивание, система визуализации EnVision, хромоген DAB.. Увел. Х 400

Фото 93. Экспрессия HER-2/neu (C-erB-2 Oncoprotein), клон СВ11, производство ДАКО Progesteron receptor (клон 636, производство DAKO). Иммуногистохимическое окрашивание, система визуализации EnVision, хромоген DAB, х 400

Какие же требования необходимо соблюдать при проведении иммуногистохимического исследования?

Прежде всего правильный подбор моноклонального антитела для исследования на парафиновом или замороженном срезе, использование адекватной и высокочувствительной системы визуализации, соблюдение необходимой рН среды, для чего желательно закупать готовые буферы. Обязательным условием является использование позитивных и негативных контролей для проверки работы реактивов. Для позитивного контроля рекомендовано выбирать опухоли с умеренной позитивностью. Оценивается окрашивание только ядер опухолевых клеток, окраска цитоплазмы при правильном проведении реакции должна отсутствовать [104–105].

Как оценивать результат иммуногистохимической реакции?

Н. Battifora и соавторы установили, что если более 5% опухолевых клеток имеют окрашивание ядер любой интенсивности, то реакция считается позитивной [97]. Большинство исследователей более значимым считают окрашивание 10% опухолевых клеток, при этом не оценивают интенсивность окраски [101]. D.C. Wilbur и соавторы предлагают полуколичественный метод оценки реакции — HSCORE-метод. В нем используется формула, расчет которой базируется на проценте клеток с окрашенными ядрами и интенсивности окрашивания.

HSCORE=3(% клеток с интенсивно окрашенными ядрами) = 2 (% клеток с умеренно окрашенными ядрами) + 1 (% клеток со слабо окрашенными ядрами).

В исследовании D.C. Wilbur и соавторов результаты HSCORE считаются позитивными в отношении рецепторов эстрогена при уровне ≤ 20, а в отношении рецептора прогестерона равном — 5. Можно использовать различные методы оценки результатов реакции, мы предпочитаем определять процент клеток с окрашенными ядрами и указывать интенсивность окраски от одного до трех плюсов (1+ — слабое, 2+ — умеренное, 3+ — выраженное окрашивание). Положительной реакция считается при наличии 10% и более опухолевых клеток.